Методы визуализации микрообъектов

Световая микроскопия (СМ)

Микроскопия в светлом поле (классическая СМ)- наиболее распространенный метод световой оптической микроскопии, основанный на изучении препарата в проходящем свете:
- свет от источника (осветитель) собирается линзами конденсора и пропускается через изучаемый препарат,
- далее свет направляется в линзы объектива, в фокальной плоскости которого формируется изображение,
- сформированное изображение проецируется в линзы окуляра и после увеличения направляется непосредственно в глаз наблюдателя или выводится на экран монитора,
- максимальное увеличение – 1000-1500 раз, разрешающая способность - 0,2 мкм

Фазово-контрастная СМ - метод световой оптической микроскопии, основанный на изменении фазы световой волны, проходящей через прозрачные бесцветные структуры, благодаря чему повышается контрастность изображения:
- используется для изучения неокрашенных живых или фиксированных клеток;
- изобретен в 1932-35 гг Ф.Цернике,
- Нобелевская премия по физиологии и медицине 1953 г.

Микроскопия в темном поле - специальный вид СМ, в котором контраст изображения увеличивают за счет регистрации только света, рассеянного изучаемым образцом:
- в отличие от микроскопии в светлом поле лучи освещают объект не снизу, а сбоку и не попадают в глаза наблюдателя: поле зрения выглядит темным, объект - светящимся;
- такой ход лучей обеспечивается конденсором темного поля, содержащим специальную маску;
- метод используется для изучения живых неокрашенных биологических объектов — простейших, изолированных клеток, тканевых культур.

Люминесцентная СМ - метод световой оптической микроскопии, основанный на наблюдении люминесцентного свечения микрообъектов при освещении их сине-фиолетовым светом или ультрафиолетовыми лучами:
- источники свечения:
  - наведенная (вторичная) люминесценция после предварительной окраски флюорохромами (красители, которые избирательно связываются с определенными структурами клеток).

Поляризационная световая микроскопия
- метод световой оптической микроскопии, основанный на освещении объекта поляризованным светом;
- применяется для обнаружения и изучения объектов или их структур, обладающих свойствами анизотропии или двойного лучепреломления (миофибриллы, волокна соединительной ткани, кристаллические структуры).